Метод окраски микропрепаратов по Романовскому-Гимзе

Метод окраски микропрепаратов по Романовскому-Гимзе - это один из самых популярных методов окрашивания бактерий, простейших, а так же клеточных структур и тканей самых различной структуры. Данный м метод используется в том числе и для исследований крови посредством световой оптической микроскопии. Окраска по Пинчуну-Романовского-Гимзе впервые была предложена в 1904 году Густавом Гимзой.

Посредством данного метода окраске подлежат ацидофильные образования в разные оттенки красного цвета. Образования базофильного характера окрашиваются в цвет от пурпурного до синего.

Момент окрашивания:

Перед началом окрашивания готовый краситель жидкого вида разводят в дистиллированной воде в соотношении 1-2 капель красителя на 1 мг воды. Мазки окрашиваются во влажной камере при температуре  37 °C в течение 20-25 минут. После завершения окраски мазки промываются проточной водой, сушатся на воздухе, а затем исследуются с помощью масляных импрессий.

Красящую смесь Романовского-Гимзы, в основе которой имеется краска Романовского Райта, растворяют в виде порошка в смеси равноправных объемах глицерина и метилового спирта в соотношении 800 мг красителя к 100 мл растворителя.

Краситель обладает плохой растворимостью, поэтому его следует перетереть  с растворителем  в количественном соотношении 300мг к 100 мг, затем, добавлять краситель при этом постоянно помешивать массу до получения требуемой концентрации. На приготовление красителя требуется несколько дней. Следует акцентировать внимание на том, что в качестве растворителей нужно применять химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как именно примеси являются причиной ухудшения свойств красителя. 100 % этиловый спирт может стать идеальной заменой метиловому спирту. Готовую красящую смесь следует хранить в плотно закрытом  сосуде в прохладном сухом месте.

Специальный раствор Гимза. Составляющие красителя:

• Азур 1 — 3,772 г
• Эозин — 2,165 г
• Метиленовая синька (медиц.) — 1,563 г
• Метанол (ЧДА) — 750,0 мл
• Глицерин (ЧДА) — 256,0 мл

Метод окрашивания:

Мазки, акцентированные в метиловом спирте, окрашивают на протяжении 40-120 минут раствором, в состав которого входят 1 мл приготовленной краски жидкой формы, 2 мл главного буферного раствора и 47 мл дистиллированной воды. Используют фосфатный буфер, на рН которого оказывает влияние вид мазка:

• мазок костного мозга — 5,8 — 6,0;
• мазок крови — 6,4 — 6,5;
• выявление простейших — 6,8;
• малярийные плазмодия — 7,0 — 7,2.

Ополаскивание проводят в дистиллированной воде, затем высушивают и изучают при иммерсии.

Результаты окрашивания:

Амастиготы Leishmania tropica, находящиеся – в макрофагах. Увеличение 10×100, окрашивание по Гимзе.

Бактерии вследствие окрашивания приобретают фиолетово-красный оттенок, цитоплазма клеток —  голубой цвет, ядра —  красный. Вследствие окраски простейших их цитоплазма становится голубого цвета, а ядра — красно-фиолетового.